1 實驗室安全
1.1 微生物實驗室的生物安全性
1.2 科室安全文檔
（a）生物危害防護：實際操作規(guī)程見（《實驗室生物安全通用要求》，中華人民共和國國家標準GB19489-2004。2004-01-05發(fā)布，2004-10-01實施。）
（b）實驗室安全：原則和措施見（《微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則》，中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WS 233-2002。2002-12-03發(fā)布，2003-08-01實施。）
1.3 應用：
以上的操作規(guī)程應用于微生物科室的所有部門。工作人員或訪問人員必須遵守各項規(guī)定。
1.4 關于新規(guī)定或現(xiàn)行規(guī)定的修改案：
任何新規(guī)定或現(xiàn)行規(guī)定的修改案必須通知負責科室安全的人員及相關人員，他們將建議科室主任考慮實施。
1.5 生物性危害
1.5.1 與各種操作有關的生物危害水平取決于：
a.處理的傳染性物質的本身：
按照傳染性物質對個人和社區(qū)和潛在危險性以及經空氣傳播的可能性，其劃分成不同等級。所采用的等級劃分詳見”《實驗室生物安全通用要求》”；原則和措施（見《微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則》）。
b.使用的設備和設施：
處理不同等級的傳染性物質的要求在”實驗室安全”中已規(guī)定。這些符合要求的設備都要承擔重要臨床工作，科室負責人必須保證中應污染物水平。
c.培訓，特別是員工的安全性培訓和安全性經驗積累。所有員工應該接受一定訓練，能安全處理任何實驗室可能碰到的物質，避免將實驗不能處理或規(guī)定之外的傳染性物質暴露在實驗室，即使暴露事故在實驗室，即使暴露事故發(fā)生也要會正確處理。
1.5.2 傳染性物質的分類
1.5.2.1分類系統(tǒng)
生物危害防護：〔見1.2 (a)〕，根據(jù)生物因子對個體和群體的危害程度將其分為4級，危害等級Ⅳ最具危害性。
1.5.2.2危險群/生物安全水平：1－4
a.危險群/生物安全水平：1——對健康成人無致病性，對社區(qū)無危害性。通常一般微生物操作就足夠，不需特殊安全設備，工作的附近要有洗手設施。培養(yǎng)基上包含未鑒定物，因此，妥善處理對各級安全水平都至著重要。
b.危險群/生物安全水平：2——人類疾病相關物質，這種物質對實驗室工作人員有中度危險，并具有一定程度社區(qū)危險性。醫(yī)院微生物室所涉及的絕大多數(shù)物質屬此安全水平，生物危害警告應張貼，并且限制接近，應用醒目標語，若是能產生空氣傳播或飛濺的I，II類物質都就使用相就的操作臺。實驗室就提供類似防護衣和手套，眼罩尤其是配戴隱形眼鏡者，也應提供類似安全水平的洗手設施，并且臨近工作區(qū)也應有高壓滅菌裝置。所有廢物和反復使用設備的去污染應有特定的程序。
c.危險群/生物安全水平：3——人類疾病相關物質，具有潛在空氣傳播性，能引起嚴重，致命疾病，對實驗室工作人員高度危險，并具有一定程度社區(qū)危險性。所有含有或懷疑含有生物案的標本必須標以”小心污染”標簽，并且同時標于盛放標本容器和申清單。然而作為預防保護還不足夠。應對所有血液，體液，分離的人體組織等有普通防護意識，它們都應視作傳染源。在此生物安全級，實驗室應控制對其接近。凡涉及該類物質都應使用I或II類工作臺操作，也可以遵循II級操作注意事項，對所有廢物進行去污染處理，包括工作服和重復使用設備。
d.危險群/生物安全水平：4——對個人的危險如生物安全3級，但對社區(qū)有高度危險性。這些傳染性物質包括：
蜱源性腦炎病毒
支里半亞－剛果牛血熱病毒
Marburg Virus
艾波拉病毒
Lagsa fever Virus
Junin HF Virus
Machupo HF Virus
Guanaruto HF Virus
Herpesvirus simiae (B Virus)
1.6 以下預防措施，所有實驗工作人員必須遵守：
1.6.1 工作服
a.所有實驗室成員在工作期間必須始終穿著所提供的工作服。離開實驗室時，工作服須掛在指定地方，不得在實驗室外冼工作服。
b.在處理含有或懷疑含有生物安全3級物質的標本時，必須在工作服外穿隔離衣。
c.在生物安全操作臺內處理標本和培養(yǎng)基時，必須戴手套。
1.6.2 洗手池
洗手池須供應洗潔劑和紙巾。
1.6.3 洗手
所有工作人員在離開工作區(qū)必須洗手，并且要先脫去工作服和手套。
1.6.4 食物，飲水，吸煙，化妝品
食物和飲料不允許帶入任何處理標本的房間.不允許在處理標本的任何地方吸煙.不允許在處理標本的任何地方使用化妝品。
1.6.5 傷口和擦傷
手上的傷口和擦傷必須覆蓋保護物。
1.6.6 個人衣物
個人衣物不允許帶入實驗室，并且必須保存在帶鎖的柜子里。
1.6.7 口吸移液管
這是禁用的。要求使用機械移液裝置。
1.7 常規(guī)預防措施應用于所有血液、體液、組織標本的操作中：
1> 無論何時都應盡可能避免使用注射器，針頭或其它銳器。
2> 使用過的針頭和一次性切割器必須丟入專門的帶有蓋子和桶內，以備安全處理、防止容器過滿盛裝。
3> 使用過的針頭不許重新使用或再用手操作。
4> 打爛的玻璃必須放入堅硬的容器（不要用手），然后再放入黑色垃圾袋，如果是污染的，使用黃色垃圾袋。
5> 在接觸具有潛在性傳染性標本培養(yǎng)基、組織，必戴保護性手套，防止皮膚直接接觸。如果手套有可見的污染，必須先除去污染，再更換。手上有皮炎或傷口的工作人員的需要間接接觸傳染性物質的人員應戴保護性手套。
6> 在處理完標本、結束工作，甚至在上述規(guī)定帶手套時，應常規(guī)洗手。
7> 當血液、血液制品或其它體液污染發(fā)生時，應停止工作洗手，戴一次性手套再清除污染區(qū)。建議用含有效氯1000ppm的次氯酸鈉溶液。如果污染區(qū)較大用浸有次氯酸鈉溶液的濕布覆蓋10min去污染，并標示相應的警告，丟棄廢物及手套到生物安全級物理容器。注意飛濺的水滴和流淌會將污染帶到主污染區(qū)以外。
8> 所有在實驗室使用的具有潛在污染性的物質都需去污染，最好先高壓，再做處理。
9> 任何可能產生飛濺或氣霧的操作都應在生物安全操作臺里進行。這些操作包括離心，分離血清，混合，超聲，收集組織受精卵，以及處理含有濃集的感染物質標本。
1.8 實驗室物質處理
a> 黑色塑料袋用來收集未污染或經高壓過需處理的廢物。
b> 廢紙屢用來收未污染的廢紙，用過的紙巾等。
c> 所有可能傳染的物質必須高壓或焚化。
d> 所有丟棄的標本，培養(yǎng)基和實驗室廢物必須放在專門容器里
e> 用白色聚丙烯罐盛裝2%新鮮配置次氯酸液，以供工作中丟棄標本，污染吸頭，棉拭子臨時處理待一天工作結束之后，再經高壓處理。
f> 黃色塑料袋用來處理污染的實驗室廢物。它們應封口再由工人拿去焚燒。
g> 帶蓋，帶標簽硬質容器用來盛裝針頭的銳器。
1.9 實驗室傳染性物的消毒
高壓
a.所有培養(yǎng)基的傳染性物質都要高壓，除非準備焚燒的，高壓的最大好處是使傳染性物質離開實驗室可保證安全。
b.用作此目的的高壓設備應在醫(yī)學技師監(jiān)督下由實驗室工人操作。
c.高壓設備應定期由醫(yī)院設備組測試，檢修。這些測試包括商業(yè)使有的芽胞試紙實驗。多個高壓設備應有使用記錄，并自使用之日起由醫(yī)學技師連續(xù)記錄。任何不符都要向安全人員報告。
1.10 去污染
去污染劑：
1> 次氯酸溶液：用白色聚丙烯罐裝新鮮配置的含有效氯1000ppm的2％次氯酸溶液，放在多個工作室。
2> 5%的Printol：其50％水溶液用來處理濺在地板和家具上的污染。
3> 戊二醛：新鮮配制成一定濃度，主要用于不能使用次氯酸鈉的儀器去污染，如離心機等。
4> 75％乙醇：主要用于對清潔表面的快速去污染。
1.11 離心機
1.11.1 注意事項：
a> 使離心機用的試管應具是厚管或塑料的，離心前應仔細檢查是否缺損。
b> 離心機需放置在合適的位置，操作都應能看見離心缸，以便能正確地將離心架放在轉子上。
c> 離心桶和離心架配對使用，負載后需仔細平衡。
d> 為避免脫架和試管內溶液濺出，開始采用低轉速，然后逐漸升高。
e> 離心機內缸應由高級人員定期檢索，內壁必須用戊二醛定期清潔，去污染。
f> 在對含有或懷疑含有生物安全操作3級標本離心時，必須加蓋密封，密封蓋只有在一級生物安全操作臺內才能打開。
1.11.2 離心時，試管破裂
a> 如果正在離心時，發(fā)生或懷疑發(fā)生試管破裂，電動機應立即斷電，并在30min后才能打開離心機蓋。
b> 如離心后發(fā)現(xiàn)破裂，應立刻關閉機蓋，保持至少30min。
c> 立即通知安全員。
d> 戴厚手套，使用鑷子或用鑷子夾棉鑒清除破碎玻璃碎片。
e> 所有破裂試管，玻璃碎片，離心桶和轉子必須放在專門消毒劑中去污染，要求消毒劑不具腐蝕性，對浸生物安全物質有效。然后，或者浸泡至24小時，或者高壓。
f> 未破裂，帶蓋的試管也應放在另一含有消毒劑的容器中1后，再對其內容物處理。
i> 離心缸必須用戊二醛棉拭子清潔，過夜，再重復擦拭，再用水清潔洗凈并干燥。
g> 含有生物安全3級物質的密封離心桶必須在密封狀態(tài)下取出，在一級生物安全操作臺內打開。如果試管破裂，離心桶密封蓋應松松地蓋上，對離心桶高壓。
1.12 破裂和溢出
任何重要的破裂的溢出都應通知安全人員。在處理含有或懷疑含有生物案例的溢出物，應先得到安全人員的建議。
1.12.1 病毒培養(yǎng)基的泄漏
a> 用浸有20％次氯酸鈉的紙巾覆蓋濺灑出的污染物用容器碎片。
b> 覆蓋10－15min。
c> 戴一次性手套，清掃紙巾和碎片于合適的容器（如塑料袋，但不包括含有碎玻璃或其它銳利物體），用一片硬紙板去清掃，不能用刷子或塵撣，除非它們適于高壓。手指遠離碎玻璃。
d> 將碎片和使用后的廢物放在實驗室廢物箱。
e> 用常規(guī)工作消毒劑擦拭污染區(qū)及其周圍可能飛濺區(qū)。
1.13 泄漏的標本
實驗室不泄漏的標本，但要以塑料密封后退還到病房。
1.14 紫外線消毒：培養(yǎng)基，試劑分裝和病人血清應存放－70°C和－30°C冰箱。操作存放于－30°C或以下溫度冰箱物質，應戴手套，例如當標本從低溫冰箱取出或放入時。
1.15 生物安全柜（臺）
實驗室應配備II級生物安全柜。
1.15.1 級別
I ：基本要求：定向流動保護，要求氣流從外流入安全柜，并且遠離操作者，指向傳染物。經HEPA過濾排后，緊好由導管引向室外，以便清除去污染后的各種蒸汽。
II：基本要求：經過濾氣體垂直流向，既保護操作者也要保護工作不受污染。
IIA：70％的過濾氣體重新循環(huán)至工作區(qū)，廢氣導向室外經HEPA過濾。和內流經式工作區(qū)的氣流速度平均0.4m/s或略高。
IIB：流進氣體流速平均0.5m/s或更好。按照不同型別（IIB1，IIB2，IIB3），氣體排出比例從70％到100％。根據(jù)工作選擇不同型。如有毒化學物質和放射線同位素不能再循環(huán)至工作區(qū)。
III ：基本要求：操作者與傳染物安全隔離，并且整個操作過程都要提高。安全柜所在的環(huán)境也要一定程度隔離，以防手套破裂。
1.15.2 生物安全柜的安裝
安全柜要發(fā)揮某安全防護功能必須注意安裝位置，廢氣應通過管道以保護環(huán)境不受污染。如果需購置這類設備應聯(lián)系CUHK安全辦公室，在種類，牌子，樣式，安裝位置和安裝以及與其它設施的相鄰關系上獲得指導。
1.15.3 常規(guī)檢查和安全操作以及工作區(qū)的消毒
有一份操作規(guī)程詳盡地敘安全柜的常規(guī)使用也應包括安全柜發(fā)生意外時應采取的行動。每一個使用者必須閱讀規(guī)程使后簽名。
1.15.4 注意：
安全柜應盡可能避免使其處于不安全狀態(tài)，但有時因為安全柜的意外，使用者被迫這樣做。此時，應張貼注意以警告其它人不得再使用。
1.15.5 去污染和再認證
由受過訓練的人員,配戴個人防護用具,來做污染工作。要求：安全柜在密閉條件下用干燥多聚甲醛蒸汽醺蒸，使用濃度8500ppm。（安全柜的體積應包括外周供應和廢氣過濾設備。）在溫度20－25°c，相對溫度不低于60％環(huán)境保持4h，甲醛蒸汽，如果允許，可直接抽出室外，若不允許可在安全柜內用氨基重碳鹽吸收。
因為空氣有限的穿透力，在處理潛在傳染性物質時最好使用HEPA過濾器，以及高壓或焚化后再丟棄。
1.17.5.2 再認證
這項工作由專門人員進行，去污染后安全柜性能再認證定，及過濾器的更換，測試是否有漏氣，調試空氣流速是否合規(guī)定，以及檢測過濾器的性能。再認證應至少一年做一次，或是裝置移動，過濾器維修后。應備有去污染，維修和再認證的記錄，并且應方便使用者的查閱。
2. 實驗安全操作程序：
2.1 工作人員在采集標本過程中應當防止病原微生物擴散和感染，并對標本的來源、采集過程和方法等作詳細記錄。
2.3 實驗過程中絕對禁止吸煙、飲食等，不要以手撫頭面部等。
2.4 處理樣本的過程中易產生高危害氣溶膠時，要求同時使用適當?shù)膫€人防護裝備、生物安全柜和/或其它物理防護設備。如可產生含生物因子的氣溶膠，應在適當?shù)纳锇踩裰胁僮?。細菌的分離培養(yǎng)、菌種開封、轉種、研磨、稀釋等操作，均應在生物安全柜中進行。
2.5 使用接種環(huán)進行操作時，接種環(huán)應在工作燈的內焰中燃燒，以避免菌液或菌塊飛濺。
2.6 稀釋菌液時，吸管、針管要緩慢插入試管或燒瓶底部，小心操作避免產生氣泡或氣溶膠。
2.7 使用注射器加樣時，用過的針頭切勿再重新入套或拔開注射器與針頭，應直接放入銳器收集器，以免劃破皮膚造成接種感染。
2.8 菌株庫要設專人管理，并按照國家微生物菌毒種管理辦法執(zhí)行。2.9進行毒菌操作過程中，不要穿戴巳經污染的防護性手套觸摸門柄、儀器或毒菌區(qū)以外區(qū)域，避免由于粗心擴大污染范圍。
2.10 試驗結束后，操作過程中所有可能與生物危險物接觸或被污染的試驗器械和物品，能夠高壓消毒的必須高壓消毒，不能進行高壓消毒的設備、儀器，應使用有效的消毒劑擦洗后再以紫外燈近距離長時間消毒。
2.11 實驗中發(fā)生意外污染情況，應立即通知主管人員并做好處理污染物和相應區(qū)域的準備，不得擅自采用其它禁止的方法進行消毒處理。
2.12 實驗室內任何微生物的樣本，廢棄物都必須經高溫高壓滅菌后，方可按一般垃圾處理。
2.13 實驗室所用任何個人防護裝備應符合國家有關標準的要求。實驗室應確保具備足夠的有適當防護水平的清潔防護服供使用。還應穿戴其它的個人防護裝備，如手套、防護鏡、面具、頭部面部保護罩等。
3. 實驗室污物處理及消毒操作程序：
3.1 實驗室含有生物危險物的臨床標本及被污染的一次性用品，試驗完成后，應在操作臺或實驗區(qū)域內以紫外燈近距離照射消毒 2小時以上，再經高壓消毒后方可丟棄或焚燒。
3.2 可重復使用的實驗用品及器材，完成實驗后，應在操作臺或實驗區(qū)域內經紫外燈近距離照射消毒2小時以上后，再交有關人員進行高壓消毒和煮沸洗刷。
3.3 實驗用的試管、吸管、注射器，須裝在加蓋不漏的容器內，經高壓滅菌后取出。
3.4 培養(yǎng)物或實驗室垃圾，在丟棄前必須經高壓消毒和紫外燈近距離長時間照射處理。不允許積存垃圾和實驗室廢棄物。已裝滿的容器應定期運走。在去污染或最終處置之前，應存放在指定的安全地方，通常在實驗室區(qū)內。
3.5 實驗室廢棄物應置于適當?shù)拿芊馇曳缆┤萜髦邪踩\出實驗室。有害氣體、氣溶膠、污水、廢液應經適當?shù)臒o害化處理后排放，應符合國家相關的要求。
3.6 實驗過程中，如標本或含標本的前消化處理液被打翻污染了操作臺或地面，應以吸滿70%酒精的衛(wèi)生紙覆蓋污染區(qū)，15分鐘以后衛(wèi)生紙方可移去。
3.7實驗室內未經消毒的污水，禁止直接排入公共排水系統(tǒng)，更不允許混入居民生活垃圾。

4. 意外事故處理程序：
4.1 如果發(fā)生意外，必須立即通知實驗室主管人員和醫(yī)院生物安全辦公室，并在有關人員的指導監(jiān)督下對出事現(xiàn)場進行處理，絕對禁止未經報告而私自對出事現(xiàn)場給予非規(guī)范的處理。
4.2 實驗過程中，如污染物濺落到身體表面，或有割傷、刺傷、燒傷、燙傷等情況發(fā)生，應立即停止實驗工作進行緊急處理，更換被污染的實驗服，皮膚表面用消毒液清洗，傷口以碘酒或酒精消毒，眼睛用無菌生理鹽水沖洗。
4.3 如果發(fā)生菌液溢出，含菌種的培養(yǎng)管破碎等，造成中 、小面積污染，可用比污染面積大25%以上的紗布覆蓋污染區(qū)域，邊緣用脫脂棉圍住，向紗布傾倒5%苯酚溶液或70%的酒精，浸泡2小時以上（其間適量加溶液防止干燥），再經紫外燈近距離（1米內）照射2小時以上；被污染的器械、容器等立即浸泡于70%酒精中2小時以上，再次著防護衣進入房間，將污染溢出物和用于清潔的紗布放入可耐受高壓的雙層塑料袋內并盡快高壓。
4.4 如果發(fā)生氣溶膠污染或大面積污染，應立即停止實驗并關閉實驗室，對污染區(qū)域進行紫外燈照射消毒過夜；第二天對污染區(qū)進行24小時封閉空氣熏蒸消毒（乙醛消毒法：5ml乙醛＋2g高錳酸鉀/m3空間）。
4.5 臨床醫(yī)務人員應對事故受害者和消毒人員進行醫(yī)學隨訪。